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小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)ELISA试剂盒实验操作注意事项

作者:admin时间:2021-10-27 10:24 次浏览

信息摘要:

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据技术部6月17日11点58分透露:(http://www.spbio.cn/cont/22325.html)

 

wps1.png   小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

 

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:                                                           48T 96T

15 IU/L - 320IU/L

使用目的:

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙酰胆碱酯酶(AchE)活性

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)水平。用纯化的小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乙酰胆碱酯酶(AchE)再与HRP标记的乙酰胆碱酯酶(AchE)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙酰胆碱酯酶(AchE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)活性浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:640IU/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存


样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

320IU/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

160IU/L

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

80IU/L

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

40IU/L

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

20IU/L

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

2加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4配液:将30倍(48T20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T20倍)稀释后备用

5洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7温育:操作同3

8洗涤:操作同5

9显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

wps2.png计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。 

 

 

(此图仅供参考)

操作程序总结:

wps3.png 

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期:

1试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批间应分别小于9%11%

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武汉赛培生物科技有限公司  
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武汉赛培生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业,自主研发抗体、免疫学试剂盒、生化试剂、分子生物学试剂等多用途多属种高品质产品。

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企业理念:诚信为本、品质至上;创新驱动、合作共赢。

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